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漂亮、均勻的細胞培養板是怎么鋪出來的?
  • 發布日期:2022-10-21      瀏覽次數:520
    •   做貼壁細胞的實驗,經常需要做細胞鋪板。這個實驗看似簡單,其實也不是那么好做的。關鍵是要鋪得均勻鋪得平整,要是中間密周圍稀,或者周圍密中間禿頂,那就露怯啦。
        從經濟和高效的角度來說,需要根據實驗目的選擇不同規格的細胞培養板。如在進行藥物對待測細胞半抑制率(IC50)測試時,通常使用96孔板,一方面可以設置濃度梯度;另外還可一次性測多個藥物,減少實驗誤差。
        1、收集細胞要混勻
        消化后的細胞一定要充分混勻,要把聚在一起的細胞團充分地吹打開,最好是單個的狀態,但同時又不能損傷細胞,可以用玻璃吸管的移液器操作。離心也很有講究,一般用1000 rpm/min即可。離心力太大細胞容易抱團!然后懸浮離心后的細胞團時,先不要把所有液體都加進去!一般先加2mL液體,然后用1mL移液器輕輕將細胞吹起,細胞要像云霧一樣散開,這樣易于形成單細胞。
        2、接種細胞須小心
        鋪6孔板,12孔板或24孔板,先在每個孔里面加1mL的培養基,晃動使之鋪勻整個孔底,然后加入1 mL的細胞懸液。從孔的左邊靠近底部慢慢加入,這樣細胞懸液會平鋪在整個孔底,細胞分散較均勻,注意加完細胞懸液后要放工作臺靜置一下。這里又有一個竅門,放在顯微鏡的載物臺上面。因為顯微鏡的載物臺是水平校正過的,比什么桌面、超凈臺什么的要平多了。在載物臺上放置20-30分鐘,細胞不差這一會溫度和二氧化碳的,等細胞貼壁了,輕輕移入到孵箱中。
        鋪96孔板,我每孔是加100微升細胞懸液,加完半邊板48孔后,將剩下的未加的細胞懸液再混一下,再繼續加剩余的半邊板子,都加完后蓋上蓋子,左手輕輕扶住板的左邊,右手輕輕敲擊板的右邊緣,注意把握力度,敲三次即可,太大力或次數太多會導致細胞集中成堆。也有人推薦輕微的左三圈、右三圈、前三圈、后三圈。
        3、輕輕敲打勿抱團
        細胞懸液加完后,將細胞培養板抬高,對著燈光,從底部往上看,看細胞有沒有抱團。如果有抱團的話,用手指從底部輕輕敲打,使之分散。也可以用平板振蕩器稍稍振蕩一下,效果不錯。參數要設置成振幅小而頻率高哈。
        4、十字交叉要水平
        觀察和敲打后放入培養箱,然后畫“十字”,就是把細胞培養板貼著培養箱擱板,前后方向來回晃動10次,再左右方向晃動10次,正好是一個“十” 字形。然后就讓它靜靜地呆在培養箱擱板上,沒事不要去動它。這里要注意的是,托架應該裝在四根立柱相同高度的孔上,培養箱的擱板要水平校正,盡量地做到水平。擱板會向一個方向傾斜,對于貼壁時間長的細胞,就算當時混勻了,放進培養箱后也搖勻了,但是重力作用下細胞也會向一側聚集。 培養箱里面或者外面盡量不要放可以產生振動的儀器,比如蠕動泵、離心機、渦旋器一類的儀器。這些儀器產生的振動對細胞貼壁有影響,也可能會導致細胞貼壁不均勻。還是要給細胞一個安安靜靜的生長環境,讓他安靜地做個美男子好了。
    魏經理
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