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1.迅速將凍存管投入到已經預熱的水浴鍋中迅速解凍,并要不斷的搖動,使管中的液體迅速融化。
2.約1-2min后凍存管內液體*溶解,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,再拿入超凈臺內。
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細胞用架盤天平平衡后,放入離心機中3000r/min 離心3min
(五)制備細胞懸液:
1.吸棄上清液。
2.向離心管內加入10ml培養液,吹打制成細胞懸液。
(六)細胞計數:
細胞濃度以5×105/ml為宜。
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將復合細胞計數要求的細胞懸液分裝入培養瓶內,將培養瓶放入37℃和5%CO2的培養箱內2-4小時(或者24-48小時)后換液繼續培養培養,換液的時間由細胞情況而定。
初學者易犯錯誤:
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃。
2.水浴鍋內凍存管太多,導致傳熱不佳,使融化時間延長。
3.離心前忘記平衡,導致離心機損壞和細胞丟失。
4.一次復蘇細胞過多,忘記更換吸頭和吸管,導致細胞交叉污染。